Медицинский справочник
Главная страница | Добавить статью | Поиск | RSS

Здравствуйте, Guest

Поиск:

БУДЬТЕ ЗДОРОВЫ!
ПОИСК СРЕДСТВ ЛЕЧЕНИЯ:
Google- аптека
Энциклопедия врача » Биохимия » Строение, свойства и функции белков » Физико - химические свойства белков и методы их разделения

Энциклопедия врача рекомендует:


Физико - химические свойства белков и методы их разделения


ЗАДАТЬ ВОПРОС ДОКТОРУ

ПОМОЩЬ СТУДЕНТАМ


|Версия для печати|

 Индивидуальные белки различаются по физико-химическим свойствам:

1)форме молекул;

2)    молекулярной массе;

3)    суммарному заряду, величина которого зависит от соотношения анионных и катионных групп аминокислот;

4)    соотношению полярных и неполярных радика­лов аминокислот на поверхности молекул;

5)    степени устойчивости к воздействию различных денатурирующих агентов.

 

Растворимость белков зависит:

 

—от перечисленных выше свойств белков;

—от состава среды, в которой растворяется белок (величины рН, солевого состава, температуры, на­личия других органических веществ, способных взаимодействовать с белком).

Величина заряда белков — один из факторов, уве­личивающий их растворимость. При потере заряда в изоэлектрической точке белки легче агрегируют и выпадают в осадок. Это особенно характерно для де­натурированных белков, у которых на поверхности появляются гидрофобные радикалы аминокислот.

На поверхности белковой молекулы имеются как положительно, так и отрицательно заряженные ра­дикалы аминокислот.

Количество этих групп, а следовательно, и сум­марный заряд белков зависят от рН среды, т.е. со­отношения концентрации Н+- и ОН-групп.

В кислой среде увеличение концентрации Н+ при­водит к подавлению диссоциации карбоксильных групп СОО~+Н+->СООН и уменьшает отрицатель­ный заряд белков.

В щелочной среде связывание избытка ОН с про­тонами, образующимися при диссоциации амино­групп —NHJ + ОН->-NH2 + НОН с образовани­ем воды, приводит к уменьшению положительного заряда белков.

Значение рН, при котором белок имеет суммарный нулевой заряд, называется изоэлектрической точ­кой (ИЭТ).

В ИЭТ количество положительно и отрицатель­но заряженных групп одинаково, т.е. белок нахо­дится в изоэлектрическом состоянии.

РАЗДЕЛЕНИЕ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ БЕЛКОВ

Особенности строения и функционирования ор­ганизма зависят от набора белков, синтезирую­щихся в нем. Изучение строения и свойств белков невозможно без их выделения из клетки и очистки от других белков и органических молекул. Стадии выделения и очистки индивидуальных белков:

1.Разрушение клеток изучаемой ткани и получе­ние гомогената.

2.    Разделение гомогената на фракции центрифуги­рованием, получение ядерной, митохондриальной, цитозольной или иной фракции, содержащей ис­комый белок.

3.    Избирательная тепловая денатурация - кратко­временное нагревание раствора белков, при котором можно удалить часть денатурированных белковых примесей (в том случае, если белок относительно термостабилен).

4. Высаливание. Различные белки выпадают в осадок при разной концентрации соли в раство­ре. Постепенно повышая ее концентрацию, мож­но получить ряд отдельных фракций с преимуще­ственным содержанием выделяемого белка в одной из них. Наиболее часто для фракционирования белков используют сульфат аммония. Бел­ки с наименьшей растворимостью выпадают в осадок при небольшой концентрации солей.

5.    Гель-фильтрация — метод молекулярного про­сеивания молекул через набухшие гранулы сефа-декса (трехмерные полисахаридные цепи декстра-на, имеющие поры). Скорость прохождения белков через колонку, заполненную сефадексом, будет за­висеть от их молекулярной массы: чем меньше масса молекул, тем легче они проникают внутрь гранул и дольше там задерживаются, чем больше масса, тем быстрее они элюируются с колонки.

6.    Ультрацентрифугирование — метод, заключаю­щийся в том, что белки в центрифужной пробирке помещают в ротор ультрацентрифуги. При враще­нии ротора скорость оседания белков пропорцио­нальна их молекулярной массе: более тяжелые бел­ки образуют фракции, расположенные ближе ко дну кюветы, более легкие — к поверхности.

7.    Электрофорез — метод, в основе которого ле­жат различия в скорости движения белков в элект­рическом поле. Эта величина пропорциональна за­ряду белков. Электрофорез белков проводят на бумаге (где скорость движения белков пропорцио­нальна только их заряду) или в полиакриламидном геле, имеющем определенную величину пор (ско­рость движения белков пропорциональна их заря­ду и молекулярной массе).

8.    Ионообменная хроматография - метод фрак­ционирования, основанный на связывании ио­низированных групп белков с противоположно заряженными группами ионообменных нерас­творимых полимеров. Прочность связывания белка со смолой пропорциональна заряду белка. Белки, адсорбированные на ионообменном по­лимере, можно смыть возрастающими концент­рациями NaCl; чем меньше заряд белка, тем меньшая концентрация NaCl потребуется, чтобы смыть белок, прикрепленный к ионогенным группам смолы.

9.    Аффинная хроматография — наиболее специфи­ческий метод выделения индивидуальных белков. К инертному полимеру ковалентно присоединяется лиганд какого-либо белка. При пропускании рас­твора белков через колонку с полимером за счет комплементарного связывания белка с лигандом на колонке адсорбируется только специфичный для данного лиганда белок.

10. Для удаления низкомолекулярных соеди­нений из раствора выделяемого белка применяют диализ. Метод основан на неспособности белков проходить через полупроницаемую мем­брану, легко пропускающую низкомолекуляр­ные вещества, в частности соли. Применяется для очистки белков от низкомолекулярных при­месей, например от солей после высаливания.

 

Популярное:

Энциклопедия врача - это интересно:

http://idoktor.info/


Добавьте свой комментарий:


При использовании материалов размещённых на сайте www.idoktor.info, активная ссылка на источник обязательна. Вся информация, используемая на данном сайте, представлена исключительно в ознакомительных и научных целях и не преследует никакой коммерческой выгоды, способствуя быстрейшему разъяснению вопросов в медицинской сфере. 18+ Данный сайт может содержать информацию, не предназначенную для лиц младше 18 лет.
Яндекс цитирования Rambler's Top100 Рейтинг@Mail.ru Яндекс.Метрика